产品货号:
SYA486
中文名称:
副猪嗜血杆菌(HPS)单重荧光PCR检测试剂盒
英文名称:
HPSmonella Singleplex PCR Detection Kit
产品规格:
48T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于检测口鼻拭子、气管分泌物拭子、肺组织、关节液等样本中的副猪嗜血杆菌(HPS),用于副猪嗜血杆菌(HPS)的定性检测,其检测结果仅供辅助参考,不可用于临床诊断。
组分 | 规格 |
副猪嗜血杆菌反应液 | 720μL |
核酸提取液 | 2×1.5mL |
副猪嗜血杆菌阳性对照(HPS-PTC) | 50μL |
阴性对照(NTC) | 50μL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 本试剂盒仅用于体外检测使用,操作人员必须经过培训,试剂盒使用前请仔细阅读说明书全文。
- 不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。
- 使用时尽量避免反复冻融,冻融应不超过5次,否则建议分装后使用。
- 样本采集和处理过程应遵循生物安全管理要求。
- 荧光PCR实验严格分区操作,各区应有专用的手套、移液器等,不得交叉使用,避免污染;工作人员应遵循单方向工作原则,各工作区相对隔离。
- 测试样本时,应做好生物安全防护。
- 试验完毕后,使用过的试剂盒、样本和试剂应进行无害化处理。
- 样本采集
- 拭子样本:采集口鼻拭子样本。在装有拭子的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30sec。尽量吸出液体移到离心管中6000rpm离心20sec,取上清备用
- 体液样本:取血液至无DNA酶污染的离心管中,6000rpm离心1min,取上清备用;取唾液、关节液,气管肺泡冲洗液置于灭菌的收集管中。
- 组织样本:取肺脏,扁桃体,淋巴结,各种内脏,每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取黄豆粒大小于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中。
- 拭子样本:采集口鼻拭子样本。在装有拭子的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30sec。尽量吸出液体移到离心管中6000rpm离心20sec,取上清备用
- DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的核酸提取液,按以下说明进行核酸快速提取。
对上述固体样本取黄豆粒大小加入50μL核酸提取液;液体样本取50μL加入50μL核酸提取液;100℃恒温处理5min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL离心管,-20℃保存。- 阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样本制备区域加入阳性对照。
- 试剂准备
从试剂盒中取出副猪嗜血杆菌反应液,完全复融并振荡混匀后,瞬时离心。
设所需的PCR反应管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),配制加样见下表,瞬时离心后尽快扩增检测。成分 用量 副猪嗜血杆菌反应液 15μL×N 样本核酸/阳性对照/阴性对照 5μL×N 总体积 20μL×N - PCR反应程序
反应步骤 循环数 反应参数 产物消化 1 50℃ 2min 预变性 1 95℃ 3min PCR扩增 40 95℃ 15sec 60℃ 30sec - 在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
- 使用ABI品牌仪器时,需将淬灭基团改为NONE,请勿选择ROX参比荧光。
- 试验成立判定
- 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线;
- 阳性对照(HPS-PTC):均产生扩增曲线;
- 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
- 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线;
- 结果判定
对于可疑样本,重新提取核酸,再次进行对应的PCR检测。如果重复结果Ct值≤40且出现对数扩增曲线判为样本阳性;否则判为样本阴性。Ct值≤35 无Ct值 35≤Ct值≤40且有明显扩增曲线 FAM 阳性+ 阴性- 可疑样本
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